使用反相HPLC对离子型化合物进行分析时，需要加酸或缓冲盐对流动相的pH进行调整。这是因为当选用的pH范围不合适时，可能会引起峰分叉或峰展宽等问题。即使峰形没有问题，也可能存在保留时间上的再现性问题。

关于保留时间再现性以安息香酸为例，进行说明。右图展示了安息香酸的保留因子k’和洗脱液的pH的关系。可以看到，洗脱液的pH值在3.5至4.5之间时，存在明显变化。安息香酸的pKa为4.2，由此可以得出结论：在pKa附近对k’有明显影响。当选用k’波动很大的pH范围做方法时，pH值轻微的配制误差都会引起试验结果再现性的问题。为此，对分析条件进行设定时，推荐设定洗脱液的pH与pKa差值最好大于1。对于不能判定pKa的情况，需对洗脱液的pH和保留时间的关系进行充分检讨，选择对分离影响比较小的pH值进行设定。