可以使用直接或间接检测方法用抗体检测目标抗原（图 1）。确定使用哪种检测方法取决于目标抗原的表达水平、其可及性以及所需的读数类型。然而，每一步的优化将有助于最大限度地提高信号检测。
直接检测方法通常用于检测高表达抗原。针对目标抗原的一抗直接与报告酶（例如，HRP 或 AP）或荧光团偶联，以促进检测和可视化。酶标记抗体通常用于显色检测，需要随后与合适的底物孵育以产生信号，例如TMB、ABTS或ReadiUse™ StayRight™ PurpleDAB 的更安全的非诱变替代品。底物和酶之间的反应导致在抗原定位部位沉淀出不溶的有色沉淀物，在光学显微镜下可以观察到。对于荧光检测，一抗与荧光团（例如 iFluor™ 染料）偶联并在荧光显微镜下观察。
在间接检测中，一抗和二抗都用于检测感兴趣的目标。未缀合的一抗直接与靶标结合，而与报告酶或荧光团缀合的二抗与一抗结合。标记的二抗通常针对一抗种类的免疫球蛋白类别或亚类。例如，在兔体内产生的一抗需要在兔以外的宿主物种中产生的抗兔二抗（例如山羊抗兔二抗）。）。间接检测的一个主要优点是它能够放大检测信号，这可以通过多种二抗与单一一抗的结合来实现。灵敏度的显着提高使间接检测方法最适合检测低丰度目标。其他与 IHC 兼容的信号放大间接检测方法包括PSA™ 信号放大、亲和素-生物素复合物 (ABC) 和标记的链霉亲和素生物素 (LSAB) 方法。
未标记的一抗和二抗、它们各自的偶联物和酶底物可以直接从 AAT Bioquest® 订购。此外，可以使用商业提供的标记试剂盒直接标记抗体，例如我们用于荧光团偶联的ReadiLink™ 快速抗体标记试剂盒或我们的Buccutite™ HRP 和 Poly-HRP 抗体标记试剂盒。
使用目标特异性抗体表示直接和间接抗原检测。
FFPE肺腺癌组织中EpCAM的免疫组化检测。组织切片与MegaWox™ polyHRP 山羊抗兔 IgG一起孵育，然后分别用Stayright™ Purple（左）或 DAB（右）显色。切片也用苏木精复染。Stayright™ Purple 可产生与 DAB 相似的高灵敏度和清晰分辨率的强烈染色。
使用 PSA™ 和 TSA 扩增方法对甲醛固定、石蜡包埋的荧光 IHC。人肺腺癌阳性组织切片首先用小鼠抗 EpCam 抗体染色，然后分别使用带有山羊抗小鼠 IgG 的 iFluor 488™ PSA™ 成像试剂盒的 PSA™ 方法或使用 Alexa Fluor® 488 酪胺的 TSA 方法。如上所述，PSA™ 卓越的信号放大能力可以显着提高荧光 IHC 的灵敏度，优于 Alexa Fluor® 488 TSA 方法。用Nuclear Blue™ DCS1对细胞核进行复染。
| 可用的一抗 | 目标物种可用的二抗 | 可用的显色底物 |
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Nuclear counterstains for immunohistochemistry
| Product | Ex (nm) | Em (nm) | Spectrum | Unit Size | Cat No. |
| DAPI [4,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride] *10 mM solution in water* | 359 | 457 |  |
2 mL | 17507 |
| DAPI [4,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride] *CAS 28718-90-3* | 359 | 457 | |
10 mg | 17510 |
| DAPI [4,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride] *CAS 28718-90-3* | 359 | 457 | |
100 mg | 17511 |
| DAPI [4,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride] *CAS 28718-90-3* | 359 | 457 | |
25 mg | 17513 |
| DAPI Dilactate | 359 | 457 | |
25 mg | 17509 |
| FluoroQuest™ Mounting Medium with DAPI | 359 | 457 | |
50 mL | 20004 |
| FluoroQuest™ Anti-fading Mounting Medium with DAPI | 359 | 457 | |
20 mL | 20005 |
| Hoechst 33258 *CAS 23491-45-4* | 352 | 454 | |
100 mg | 17520 |
| Hoechst 33258 *CAS 23491-45-4* | 352 | 454 | |
1 g | 17523 |
| Hoechst 33258 *20 mM solution in water* | 352 | 454 | |
5 mL | 17525 |
| Hoechst 33342 *Ultrapure Grade* | 352 | 454 | |
100 mg | 17530 |
| Hoechst 33342 *Ultrapure Grade* | 352 | 454 | |
1 g | 17533 |
| Hoechst 33342 *20 mM solution in water* | 352 | 454 | |
5 mL | 17535 |
| Hoechst 34580 *CAS 911004-45-0* | 371 | 438 | |
5 mg | 17537 |
| Hoechst 34580 *20 mM solution in water* | 371 | 438 | |
100 µL | 17538 |
| Nuclear Yellow [Hoechst S769121] *CAS 74681-68-8* | 372 | 504 | |
25 mg | 17539 |
| Propidium Iodide | 537 | 618 | |
25 mg | 17515 |
| Propidium Iodide | 537 | 618 | |
5g | 17516 |
| Propidium Iodide *10 mM aqueous solution* | 537 | 618 | |
1 mL | 17517 |
| ReadiUse™ DRAQ5 Staining Solution *5 mM in Water* | 601 | 699 | |
50 µL | 17558 |
| Nuclear Violet™ DCS1 *5 mM DMSO Solution* | 371 | 454 | |
0.5 mL | 17549 |
| Nuclear Blue™ DCS1 *5 mM DMSO Solution* | 348 | 469 | |
0.5 mL | 17548 |
| Nuclear Green™ DCS1 *5 mM DMSO Solution* | 503 | 527 | |
0.5 mL | 17550 |
| Nuclear Orange™ DCS1 *5 mM DMSO Solution* | 514 | 556 | |
0.5 mL | 17551 |
| Nuclear Red™ DCS1 *5 mM DMSO Solution* | 631 | 651 | |
0.5 mL | 17552 |
| Nuclear Violet™ LCS1 *5 mM DMSO Solution* | 401 | 460 | |
0.5 mL | 17543 |
| Nuclear Green™ LCS1 *5 mM DMSO Solution* | 503 | 527 | |
0.5 mL | 17540 |
| Nuclear Orange™ LCS1 *5 mM DMSO Solution* | 514 | 556 | |
0.5 mL | 17541 |
| Nuclear Red™ LCS1 *5 mM DMSO Solution* | 622 | 645 | |
0.5 mL | 17542 |