货号：N510
NADP/NADPH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温
特点：
数据可靠，不会与NAD+及NADH反应
只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
享有显色底物WST专利
选择规格：100 tests
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试剂盒内含
100 tests
NADP/NADPH Extraction Buffer 20 mL×1
NADP/NADPH Control Buffer 20 mL ×1
Standard Buffer 10 mL ×1
Assay Buffer 5.5mL ×1
Dye Mixture ×1
Enzyme 110uL ×1
Standard ×1
Filtration Tu ×12
概述
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP) 是磷酸戊糖途径（一种细胞代谢途径）反应中一种重要的辅因子。NADP以氧化态NADP+和还原态NADPH的形式存在于细胞中。NADPH不光对脂肪酸、胆固醇而且对还原型谷胱甘肽的生成至关重要。另外最近的研究表明，NADP+/NADPH通过限制碳水化合物的摄入来延长寿命与NADP+/NADPH有很大关联。
NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP+/NADPH、NADPH和NADP+的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP+水平则可以通过总NADP+/NADPH减去NADPH的量计算得到。
原理
技术资料
分别检测NADP+和NADPH
分别测定NADP+和NADPH的操作步骤
*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。 通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内NADPH量，而细胞内的NADP+量则可以通过总NADP+/NADPH量减去NADPH量的计算得到。
在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准样品。使用超过12个样品时，您需要准备单独的超滤管。
使用NADP+/NADPH作为标记的研究
检索来源：Google Scholar
检索关键词：
NADP/NADPH：“NADP/NADPH”
线粒体：”NADP/NADPH”Mitochondria
癌：”NADP/NADPH”Cancer
氧化应激：”NADP/NADPH”Oxidative Stress
孔板检测中数据的可靠性
通过同时检测试剂盒内的标准溶液，可以对浓度在0.01-1 μmol/l的总NADP+/NADPH和NADPH进行定量。如果样品中的总NADP+/NADPH的浓度>1 μmol/l，可以通过稀释样品来调节。实验证实本试剂盒(NADP/NADPH Assay Kit-WST)不会与NAD+及NADH反应。
操作步骤
（1）按下图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。
※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。
（2）在每孔中加入50 μl Working Solution。
※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。
（3）在37°C培养60 min。
※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。
（4）用酶标仪在450 nm处检测吸光度。
（5）用标准曲线测定样品中总NADP+/NADPH和NADPH的量。
※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。
※NADP+的量可用下列计算公式计算：总NADP+/NADPH-NADPH的量计算得到。
NADP+=总NADP+/NADPH-NADPH
实验例
细胞样品检测实验例 (加入抗癌药物Doxorubicin)
向Jucket细胞中 (3×106 cells)加入终浓度为500 nmol/l的Doxorubicin (Dox)，在培养24 h后检测NADP+/NADPH 比值和还原型/氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)。用本试剂盒检测PBS清洗后的细胞的NADP+/NADPH比值，用 GSSG/GSH Quantification Kit II (货号：G263) 检测谷胱甘肽的比值。
在细胞内加入DOX后，产生的ROS(H2O2) 破坏了DNA、DNA修复酶 (PARP*) 被激活， 并且NADP+被其消耗。为了补充不足的NADP+，NADPH氧化酶被激活，结果在数据中则会表现为NADP+的增加。与此同时还原型谷胱甘肽 (GSH) 会被产生的ROS所消耗，因此GSH/GSSG的比值会下降。
常见问题Q&A
Q1：该试剂盒可以检测多少个样本？
A1：
| 测定“NADP*和NADPH的总量” 或”NADPH量”时 |
测定“NADP*和NADPH的总量” 和”NADPH量”时 |
|
| 样品数 | 24个样品 | 12个样品 |
*所有样品均测定3次（n=3）
上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。
Q2：可以单独购买过滤管吗？
A2：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。
Q3：工作液稳定吗？
A3：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。
Q4：样品颜色没有变化，是什么原因？
A4：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。
参考文献
1) Statins in anthracycline-induced cardiotoxicity: Rac and Rho, and the heartbreakers, Cell Death Dis., 2017, 8(1), e2564.
2) The differential effects of green tea on dose-dependent doxorubicin toxicity, Food Nutr. Res., 2015, 59, 29754.
3) Inhibition of NAMPT markedly enhances plasma-activated medium-induced cell death in human breast cancer MDA-MB-231 cells, Arch. Biochem. Biophys., 2019, 676, 108155.