MT14/mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

MT14/mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection,线粒体在生成ATP的同时会生成超氧化物。正常情况下,细胞的抗氧化酶等物质会保护细胞免受活性氧的伤害。但是,当线粒体功能异常时,活性氧过量积累会造成细胞的各种机能紊乱。因此在评价细胞氧化应激水平时,往往需要同时检测线粒体的膜电位和线粒体的活性氧。

货号:MT14
线粒体超氧化物检测用荧光染料
mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection
储存条件:0-5℃,避光
运输条件:室温

特点:

对超氧化物的选择性高
独特的荧光特性(λex: 540 nm; λem: 670 nm)

选择规格:1set,3set

产品概述

        线粒体在生成ATP的同时会生成超氧化物。正常情况下,细胞的抗氧化酶等物质会保护细胞免受活性氧的伤害。但是,当线粒体功能异常时,活性氧过量积累会造成细胞的各种机能紊乱。因此在评价细胞氧化应激水平时,往往需要同时检测线粒体的膜电位和线粒体的活性氧。

与其他试剂的比较

对各种活性氧的反应选择性

mtSOXDeep Red相较于T公司的产品Red,在各种活性氧中,对超氧化物的选择性更高。

另外,与其他公司产品所不同的是,mtSOX  Deep Red拥有独特的荧光特性(λex: 540 nm; λem: 670 nm),可以同时进行线粒体膜电位检测试剂(JC-1 货号MT09; MT-1 货号MT13)的共染色实验。

实验例

线粒体超氧化物和线粒体膜电位的同时检测

用HBSS清洗HeLa细胞后,使用mtSOX和同仁化学研究所的线粒体膜电位检测试剂(JC-1 货号MT09或MT-1 货号MT13)进行共染色实验,同时观察线粒体ROS和线粒体膜电位。

结果显示,伴随着线粒体ROS的产生,线粒体膜电位也逐渐降低。

<使用JC-1的实验操作>

<检测条件>

JC-1:绿Ex=488 nm; Em= 490-520 nm; 红Ex=561 nm; Em= 560-600 nm

mtSOX:Ex=633 nm; Em= 640-700 nm

Scale bar: 10 μm

<检测条件>

JC-1:绿Ex=485 nm; Em= 535 nm; 红Ex=535 nm; Em= 595 nm

mtSOX:Ex=550 nm; Em= 675 nm

<使用MT-1的实验操作>

<检测条件>

MT-1: Ex=561 nm; Em= 560-600 nm

mtSOX:Ex=633 nm; Em= 640-700 nm

Scale bar: 10 μm

<检测条件>

MT-1: Ex=545 nm; Em= 600 nm;

mtSOX:Ex=550 nm; Em= 675 nm

细胞内Total ROS和线粒体超氧化物的同时检测

用HBSS清洗HeLa细胞后,使用mtSOX和同仁化学研究所的细胞内ROS检测试剂(ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- 货号:R252)进行共染色实验,通过线粒体超氧化物诱导剂Antimycin或过氧化氢诱导后进行荧光观察。

结果显示,可以分别观察到细胞内ROS诱导后的荧光增强和线粒体的ROS诱导后的荧光增强。

<实验操作>

<Antimycin刺激的结果>

<检测条件>

细胞内ROS:  Ex=488 nm; Em= 490-520 nm

mtSOX:Ex=633 nm; Em= 640-700 nm

Scale bar: 10 μm

常见问题Q&A

Q1:mtSOX Deep Red的检测原理是什么?
A1:mtSOX Deep Red被Superoxide特异性氧化后会发出荧光,同时它还可在线粒体处积累,因此可以检测线粒体Superoxide。伴随着Superoxide的增加,线粒体的膜电位消失的话,核小体和细胞质会被染料染色。
Q2:每个试剂盒可以检测多少个样品?
A2:可检测的样品数如下。
・ 96-well plate: 1块。
・ ibidi 8-well plate: 6块。
・ 35 mm dish: 5块。
Q3:是否可以用培养基以外的溶液配制Working solution?
A3:可以,可使用HBSS或PBS代替培养基。
Q4:各检测仪器适用的滤光片?
A4:荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪均可检测。
・激光共聚焦显微镜
Ex/Em: 561/640-700 nm (无红色荧光染料共染时)
Ex/Em: 633/640-700 nm (与红色荧光染料共染时)
・荧光显微镜
TxRed Filter
・荧光酶标仪
Ex/Em: 535–565/660–690 nm
Q5:是否可以刺激后再染色?
A5:在线粒体膜电位正常的前提下是有可能的。
本染料依赖线粒体膜电位在线粒体处积累,因此如果药物刺激造成线粒体膜电位降低的话,染料将无法在线粒体处积累,影响检测结果。因此推荐先染色再进行药物刺激。